agosto a microbiologia

Ricetta del mese:

Estrazione di acidi nucleici da campioni fissati con formalina ed inclusi in paraffina

Mi sono trovato benissimo con il limonene. Qualche giorno fa mi è capitato di dover estrarre DNA da una biopsia renale che era stata mandata all'anatomia patologica e trattata da loro.
A me hanno poi mandato solo alcune fettine di una decina di micron.
Beh, la cosa fondamentale da fare e mettere le fettine in una provettina a fondo conico (da 1,5 ml) facendo in modo che rimangano adese alla parete. Basta poi mettere la provetta in termoblocco a 65-70°C per far si che la paraffina si sciolga e vada a finire tutta sul fondo della provettina. Con una pipetta poi si può aspirare fino a che è liquida!
Fatto questo, lavare con 1 ml di limonene, centrifugare, 2 passaggi con limonene e alcol etilico 1:1 ed ancora un paio di passaggi con alcol puro.
Aspirare poi con attenzione tutto l'alcol, e lasciare la provetta un po' di tempo col tappo aperto in termoblocco a 55°C in modo da far evaporare bene tutto.
Aggiungere poi al tessuto i vari buffer del kit di estrazione e procedere normalmente.
La PCR per poliomavirus BK è risultata positiva!